病理科主要通過(guò)制病理切片完成免疫組化實(shí)驗(yàn)來(lái)診斷疾病。用來(lái)制作病理切片的組織樣有括宮頸、痰、胸腹水及尿液等。病理切片有石蠟切片和冰凍切片兩種，常見(jiàn)的是石蠟切片。

1 取材、固定：獲取的組織樣本經(jīng)離心等處理后加入固定液，病理切片最常使用的固定液為10%福爾馬林（4%甲醛）或10%磷酸緩沖福爾馬林。固定液的用量一般為樣本的20倍左右。

2洗滌、脫水、透明：固定后的組織材料需除去留在組織內(nèi)的固定液及其結(jié)晶沉淀，否則會(huì)影響后期的染色效果。因此先用自動(dòng)脫水機(jī)或乙醇對(duì)樣本進(jìn)行脫水。純酒精不能與石蠟相溶，還需用能與酒精和石蠟相溶的媒浸液，替換出組織內(nèi)的酒精，這種媒浸液稱為透明劑。常見(jiàn)的透明劑有有二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等。

3浸蠟與包埋：把樣本放入盛有石蠟液的石蠟包埋機(jī)中進(jìn)行包埋，在包埋機(jī)中經(jīng)冷卻制成固體樣本。

4切片：包埋好的蠟塊用刀片修成規(guī)整的四棱臺(tái)，以少許熱蠟液將其底部迅速貼附于小木塊上，夾在石蠟切片機(jī)的蠟塊鉗內(nèi)，使蠟塊切面與切片刀刃平行，進(jìn)行石蠟切片。

5貼片與烤片：在潔凈的載玻片上涂抹薄層蛋白甘油，再將一定長(zhǎng)度蠟帶（連續(xù)切片）或用刀片斷開(kāi)成單個(gè)蠟片于溫水（45℃左右）中展平后，撈至玻片上鋪正，烘干或晾干。

6切片脫蠟與水化：干燥后的切片需脫蠟及水化才能在水溶性染液中進(jìn)行染色。用二甲苯脫蠟，再逐級(jí)經(jīng)純酒精及梯度酒精直至蒸餾水。如果染料配制于酒精中，則將切片移至與酒精近似濃度時(shí)，即可染色。

7抗原修復(fù)：由于之前的化學(xué)試劑對(duì)抗原進(jìn)行了封閉，熱作用使抗原肽鏈扭曲會(huì)導(dǎo)致免疫組化染色不能顯示，因此進(jìn)項(xiàng)抗原修復(fù)。把玻片放在檸檬酸緩沖液（95-99℃）10分鐘，冷卻后放在EDTA溶液（95-99℃）15分鐘，然后直接放在10 mM TE/1 mM EDTA溶液中（95-99℃）18分鐘，最后用胃蛋白酶37℃消化30分鐘。

8染色、觀察：加入抗體后4℃孵育過(guò)夜，染色。染色成功后用蒸餾水進(jìn)行沖洗，脫水后蓋上蓋玻片放在顯微鏡下觀察。

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