（一）實驗?zāi)康?/span>

通過蘇木素（堿性染料）和伊紅（酸性染料）對組織切片進(jìn)行染色，使細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)不同顏色，清晰顯示組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、排列方式，為病理診斷提供基礎(chǔ)依據(jù)。

（二）實驗材料

1.  樣本：已烤好的病理石蠟切片；2.  試劑：蘇木素染液、伊紅染液、1%鹽酸酒精分化液、自來水（返藍(lán)用）、梯度酒精（70%、80%、90%、95%、無水乙醇）、二甲苯、中性樹膠；3.  儀器：染色架、染色缸、顯微鏡、鑷子、蓋玻片、吸水紙。

（三）實驗步驟

1. 脫蠟至水：將切片放入二甲苯中脫蠟，2次，每次10分鐘；然后依次放入無水乙醇→95%酒精→90%酒精→80%酒精→70%酒精，每步5分鐘，最后用自來水沖洗5分鐘，完成脫蠟至水（脫蠟不徹底會導(dǎo)致染色不均）。

2. 蘇木素染色：將切片放入蘇木素染液中，染色5-10分鐘（根據(jù)染液濃度和切片厚度調(diào)整時間，避免染色過深或過淺），取出后用自來水沖洗，去除殘留染液。

3. 分化：將切片放入1%鹽酸酒精分化液中，浸泡3-5秒（快速分化，期間觀察切片顏色，直至切片呈淡紅色），立即用自來水沖洗，終止分化。分化的目的是去除細(xì)胞核周圍多余的染液，使細(xì)胞核染色清晰。

4. 返藍(lán)：將分化后的切片放入自來水中浸泡10-15分鐘，使細(xì)胞核恢復(fù)藍(lán)色（自來水呈弱堿性，可中和鹽酸，使蘇木素顯色更穩(wěn)定），也可放入淡氨水（0.5%）中30秒加速返藍(lán)，再用自來水沖洗。

5. 伊紅染色：將切片放入伊紅染液中，染色2-3分鐘（細(xì)胞質(zhì)染色，顏色呈粉紅色即可），取出后用自來水沖洗，去除殘留染液。

6. 脫水透明：依次將切片放入70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→無水乙醇（2次），每步3-5分鐘，脫水；然后放入二甲苯（2次），每次5分鐘，透明。

7. 封片：取出透明后的切片，在切片中央滴加1-2滴中性樹膠，用蓋玻片輕輕覆蓋（避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會影響觀察），用吸水紙吸去多余樹膠，置于通風(fēng)處晾干，或60℃烤片10分鐘加速干燥。

8. 觀察：將封好的切片放在顯微鏡下，低倍鏡（10×）找到觀察區(qū)域，再用高倍鏡（40×）觀察，細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)呈粉紅色，記錄組織形態(tài)。

（四）注意事項

1.  分化是核心步驟，需在顯微鏡下實時觀察，待切片呈淡紅色即刻終止，時間過長致細(xì)胞核褪色、過短則染色過深，可提前用廢切片練習(xí)掌握節(jié)奏；

2.  脫水透明需徹底，每步梯度酒精及二甲苯浸泡時間足額，若殘留水分或乙醇，封片后會出現(xiàn)云霧狀模糊，影響觀察效果；

3.  封片時中性樹膠用量以剛好覆蓋組織為宜，滴加后輕輕覆上蓋玻片，從一側(cè)緩慢壓合避免產(chǎn)生氣泡，多余樹膠用吸水紙輕柔拭去，防止污染切片。

文章出自：病理檢測外包      想了解更多請關(guān)注：http://www.sztcy.cn/