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組織包埋是將客戶(hù)組織標(biāo)本通過(guò)固定,取材,脫水等過(guò)程后,用石蠟作為包埋劑,將組織標(biāo)本包埋在石蠟中。
組織石蠟包埋切片實(shí)驗(yàn)步驟
1、取材:新鮮組織固定于4%多聚甲醛24h以上。將組織從固定液取出在通風(fēng)櫥內(nèi)用手術(shù)刀將目的部位組織修平整,將修切好的組織和對(duì)應(yīng)的標(biāo)簽放于脫水盒內(nèi)。
2、脫水:將脫水盒放進(jìn)吊籃里于脫水機(jī)內(nèi)依次梯度酒精進(jìn)行脫水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-無(wú)水乙醇I 30min-無(wú)水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蠟I 1h-蠟II 1h-蠟III 1h。
3、包埋:將浸好蠟的組織于包埋機(jī)內(nèi)進(jìn)行包埋。先將融化的蠟放入包埋框,待蠟?zāi)讨皩⒔M織從脫水盒內(nèi)取出按照包埋面的要求放入包埋框并貼上對(duì)應(yīng)的標(biāo)簽。于-20°凍臺(tái)冷卻,蠟?zāi)毯髮⑾瀴K從包埋框中取出并修整蠟塊。
4、切片:將修整好的蠟塊置于石蠟切片機(jī)上切片,片厚4μm。 切片漂浮于攤片機(jī)40℃ 溫水上將組織展平,用載玻片將組織撈起,并放進(jìn)60℃ 烘箱內(nèi)烤片。待水烤干蠟烤化后取出常溫保存?zhèn)溆谩?/p>
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1、固定劑應(yīng)有足夠的量,一般為組織塊體積的10∽15倍。
2、根據(jù)組織的不同和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌?,選取不同的固定劑。
3、固定時(shí)間依材料大小、固定劑種類(lèi)而異,可從1小時(shí)到幾時(shí)小時(shí),有時(shí)中間需要更新固定劑。某些固定劑對(duì)組織的硬化作用較強(qiáng),作用時(shí)間應(yīng)嚴(yán)加控制,不能過(guò)長(zhǎng)。
4、取材切面要平整,厚度不易超過(guò)2mm,否則脫水效果不能保證,
5、對(duì)于有特許要求的組織,取材時(shí)要保證對(duì)目的組織的完整保留。
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